ELISA常见问题和处理
1、无颜色 试剂孵育的时间没有按说明书操作。 确定生物素化抗体,连接的HRP试剂或链霉亲和素-HRP使用的时间是否适当。
2、不同试剂盒或不同批号的试剂混用。 重新检查试剂的标签,确准所有组分都属于正使用的试剂盒中的。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂。
3、漏加酶 检查操作流程,注意不要漏加
4、HRP酶污染了叠氮钠 使用新配制的试剂,禁含叠氮钠 标准品有问题(若在标本孔中有信号) 按说明书检查标准品的制备使用1瓶新标准品
某一容器未洗净,残留灭活酶物质
尽可能用试剂盒内容器,另觅一定要洁净、可靠使用含血清的缓冲液配制/复溶抗体 重新确认所选用的试剂 .
漏加显色剂A或B
加显色剂后观察一下液面高度
试剂配制/使用有误
将实验重做;严格按说明书操作,每次配制和使用前看清标签。
缓冲液污染
配制新新鲜的缓冲液
显色弱
超过有效期的产品可能会产生很弱的信号。
检查产品的有效期
加入试剂的体积和时间有误
确定所使用的每一个试剂的体积正确的和加入的时间是适当的。
试剂、样品用前未能平衡 用前试剂、样品置室温平衡10分钟左右