ELISA试剂盒进口大鼠如何解决产生组织切片非特异性染色

1、 抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。

2、 一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。

3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织)，ELISA试剂盒进口大鼠需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;

4、 非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;

5、 DAB孵育时间过长或浓度过高;

6、 PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;

7、 标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。

ELISA试剂盒进口大鼠解决方案

1、首先排除抗体孵育条件。一般来说，着色效果的好坏与抗体的孵育条件是密不可分的，由于用SP法已经做出来过一次且效果不错，因此对于同样组织的同一抗原进行分析，这种因素可以先排除。

2、其次，DAB孵育时间是否太长?做出来那一次我是孵育8min，后来也是8-10min，我单独做了一次实验来排除该因素。结果孵育2、5min时先出现背景，而特异性染色较浅，故这不符合常理，一般先出现特异性染色，然后随着时间的延长，会出现非特异性背景着色。

3、zui后，血清封闭的问题?以前我一般孵育15-30min，所以我单独做了一次实验用血清封闭室温1h，其它条件同做出来的那一次，结果也一样背景着色很深。

4、对PBS清洗不断地延长时间和增加次数，甚至*参照试剂盒说明书来进行操作(我以前一般一抗4度且室温复温45min、二抗37度30min、Sp反应37度30min)，以及过氧化氢灭活加强等等均未起到效果。

5、步骤和组织切片*与*次做出来的一致(包括血清也是老试剂盒内剩余的一点)，奇迹出现了：结果很好。--因为抗原抗体反应除温度、抗原/抗体浓度外，然后就是PH值，于是我测了新抗体稀释液、老抗体稀释液和PBS的PH值，ELISA试剂盒进口大鼠结果是前者偏酸性(<6、0)，而后两者均在7、5左右。