elisa试剂盒白介素类从小鼠腹水中纯化抗体常是单克陛抗休缓冲液溶解 ，用50信体积的上述缓冲特 征鉴定，应用 中的一 个重 要 步骤 。 目 析 ，然后 离心 取 上清 液。 即为正 辛 酸纯化
前zui 常用的方 法为离子 交换 层析 法， 但该法 物 。
既不 适于多 种细胞及 腹水 同时纯 化鉴定 ，也 =， DEAE-22柱 层 析：DEAE一22甩
不 适 于大规模 ，且 洗脱 液 中抗体 含量较 常 规方 法处 理 ，以含 0．02M NaG】的 0．02M
低 ，常需 浓缩后才 能 使 用。近 来 ，ReLk M pH7．4Tris-HC1平 衡。
(1987)等 报导 了正辛酸 纯化法 。本 实验 室 在 3D o虞 水 2ml对 含 0．02世 NaG】的
从 腹水 纯 化抗 HaG单克 隆抗 体 中，用正 辛 0．02 pⅡ7．4Tr~s-HC1搅 拌透 析 4小 时，
酸 法与 DEAE 柱 层析进 行对照 、分析 ，结果 上拄 ，以分 别 含 0．02M ，0．04 ，0．06皿 ，
elisa试剂盒白介素类显示了正 辛酸法有快 速 、简便 ，抗 体浓 度高 ， 0．08 ，0．10M ，0．12M ，0．15M NaC1的
适 台大量 的优 点 一 0．02世 pE[7一 Tris-HC1梯 度 洗 脱 ，流 速腹 水1分泌抗 ~-HCG单 克 隆 一计 (ShimadzuuV一24o)上读 OD280，把 0
抗体杂交瘤移植于 BALB／c小鼠腹腔 的 渗 值太子 0．1者 ，台并，即为 DEAE 纯化物。
出液 ，抗体球蛋 白类 型为 IgG 。 ， 三 ，抗体 纯 窿的鉴 定 ；(- ~ELISA法 t
二、DEAE-22柱I2x25emo … 。。 在聚辇 乙烯塑料 小 杯 条 上 ，每 孔 加 i00
三 、正 辛酸 ：上海 化荆 商店 。 H．CG．溶液 (1~glm1)，置 4~C，24小 时 ，以洗
四、聚 苯乙烯 8联小杯 条 ：美 国 ：Dyne- 涤液 (0．02M Tris-HC1pH7．4)洗涤三 次 ，
tech公 司产 品。 ． ． 吸 干。将 =种纯化 物与原 腹水分别 校正浓度
五、免抗 鼠 IgG 辣根过 氧化 物 酶 标 记 至 ]lJg／ml，然 后撬 比稀 释 ，在每 孔蜘 100／~1，
物：实验 室 自制 。 置 37。C2小时 ，同液洗涤三 次 ，吸干 ，每孔船
， ． ． 兔 抗 鼠 IgG-酶标 记物 溶液 100 ，置 37~0，
／J 1． 5小 时 ，洗 涤 三 次 (同 上 )，吸 干 ，各 孔船、 正辛酸纯化 法。3D，。腹永 2ml，加 入 新鲜酉己制的邻苯 =胺一过 氧化 氢底 物 溶 液
4m10．06M pH4醋酸缓 冲 液 ，校 正 pH 至 100／．~1，置 37'015分钟 ，加 2M Ⅱ SO 100
4．8，在 振荡下滴加 正 辛酸 60 ，室温 中混和 终止反应 ，在簿标 比色计 (Dynatech)上 读取
30分钟 ，离心 (4，O00i'pm ，30分 钟 50)，取 OD值 。
一 }二层 液 ，对 50倍体 积 pH7一 PB (137raM (= > 电泳 l
NaG1， 2．6mM lKG】， 10mM KH，PO4 1．醋 酸 纤 维 索 薄 膜 电 泳：正 辛 酸
NaⅡPo．，0．2mM EDTA)在 4。G搅拌 透析 DEAE--22纯 化物分别 以 2p,l(2mg／m1)，原
6小时，中间更换透析液 2次，然后加入等休 腹水 l 加样于醋酸纤维索薄膜，电泳液：‰
积 的饱和硫酸 铵溶液 ，elisa试剂盒白介素类置 4。030分 钟 ，离心 — —
(4，O00rpm 20分钟 )取 沉淀 ，加 2ml上述PB ·