抗卵巢抗体透明带（Zona pellucida，ZP） 抗体检测

       透明带（Zona pellucida，ZP）是围绕在卵细胞周围的一圈嗜酸性、明胶样结构。ZP有很强的免疫原性，能诱发机体产生全身与局部的细胞与体液免疫，产生抗透明带抗体（anti-zonapellucidaantibody，AZP）。AZP与女性不孕症有关。检测AZP的方法有免疫沉淀反应，间接免疫荧光法，间接血凝，胶乳凝集试验，RIA及ELISA法等。无论何种检测方法，均需透明带抗原。由于猪和人卵透明带有共同抗原，故可用猪卵透明带抗原作试验。以下介绍间接ELISA法检测AZP。

     1．试剂  ZP精制抗原：用注射器从新鲜猪卵巢中吸取卵泡液，在解剖镜下从卵泡液中收集卵子，用PBS洗数次，放在含0．1％枸橼酸钠的0．05mol／LPBS（pH7．0）中，强力振荡lmin，然后用PBS洗几次。再将卵子加热溶解后可获得热溶解抗原，即猪ZP的粗制抗原。经SephadexG-100凝胶过滤组分后便可获精制抗原。可选用高70cra，直径1．2cra的层析柱。凝胶柱用0．01mol／L，pH7．4PBS流洗平衡后，加样，再用PBS洗脱，分管收集。将*蛋白峰用30％聚乙二醇或变色硅胶浓缩，经PBS透析24h后即为ZP精制抗原。

   2．操作步骤  每孔用0．1mLZP精制抗原（浓度用方阵法滴定）包被，置4~C过夜，用洗涤液洗3次，每次3min：每孔加含10％小牛血清的PBS 0．1mL，37~C封闭30rain，用洗涤液洗3次。加待测血清0．1mL，37℃!h后洗3次。加zui适浓度HRP-羊抗人IgC 0．1mL，37~C反应1h，洗涤。加新鲜配制的底物溶液，每孔0．1mL，室温作用20min后，各孔加2mol／LH2S040．1mL终止反应。

     3．注意事项  如果用猪ZP做为抗原检测人血清AZP，待测血清须用猪红细胞吸收。如用人卵ZP作为抗原，待测血清须用AB型人红细胞吸收。

    4．结果判定与临床意义  与阳性、阴性对照血清参比，目测显黄棕色者为AZP阳性， 无色或极淡黄色为阴性。也可测492nm的吸光度（A）值。若待测标本A值大于或等于阴性对照血清A值的X+2．5S为阳性。