为您带来ELISA试剂盒实验优化做到这五点,下个大神就是您!

一、封闭液、洗涤液及保护液的优化
    1.封闭液的优化：采用文献报道的方法进行封闭。其封闭液的组成为：10mM磷酸盐缓冲液含1%的牛血清白蛋白(BSA)。
    2.洗涤液的配制：采用文献报道的方法配制洗涤液。
    3.酶标板保护液的优化：酶标板经过封闭后在低温下仅能存放2周左右，为了延长固相酶标板上抗原的稳定性，我们增加了一步保护酶标板的程序。在10mM的磷酸盐中加入适量的糖、无关蛋白质、庆大霉素以及二价金属离子，作为酶标板保护剂，在封闭完后加入保护液于4℃冰箱中孵育放置一个晚上，同时与未做保护的酶标板进行对照，然后将保护的及未保护的酶标板置于37烘箱中放置15天，考察保护液对酶标板的稳定性的影响。

二、酶标抗体稀释度的优化
    抗原包被浓度为4ug/ml,将酶标抗体做系列稀释：1:100，1:200；1:300；1:400；1:500；1:600；1:1000；经孵育、洗涤后、显色终止后，用自动酶标仪分析，选择A值为1.5左右的酶标抗体稀释度为zui适工作浓度。
 

三、底物液的优化
    常用的作为酶联免疫吸附试剂有OPD和TMB系统，由于OPD有致癌的危险性以及用前需要溶解等诸多缺点，因此我们选用TMB作为底物系统，采用文献报道的方法：取适量的TMB溶解在DMSO中，然后加入适量的超纯水，配制作为底物B液；溶解适量的过氧hua氢尿素于100mM磷酸-柠檬酸缓冲液中，配制作为底物A液，用前将底物A液及底物B液等体积混合。在文献报道的基础上，上海樊克适当调整了TMB的用量以及过氧hua氢尿素的用量，并加入了酶促进剂，与文献报道的底物进行比较。实验方案为：将活化的辣根过氧hua物酶分别作1:1000；1:10000；1:100000；1:200000；1:400000；1:800000等系列稀释，比较两种不同配方的底物的灵敏度。
 

四、抗原抗体反应时间的优化：
    抗原抗体反应会随着时间的增加，反应量也增加，但达到一定的时间后，反应即达到平衡，我们取反应10min，20min，30min，40min，50min，60min，70min,90min等8个点进行比较，以确定zuijia抗原抗体反应时间。
 

五、底物作用时间的优化
    在其它条件相同的情况下，我们取5min,10min,15min,20min,25min,30min,35min,40min,50min,60min,80min等11个时间点进行比较，确定zuijia的底物作用时间。