1)表皮细胞培养
1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮
肤更好,切成0.5~1平方厘米小块。
2.EDTA处理:先置入0.02%EDTA中室温置5分钟。
3.冷消化:换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。
4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与层分开。
5.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋
白酶中,37℃再消化30~60分钟。
6.用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液。
7.培养液:通过80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle
液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO温箱培养。2
2) 乳腺组织培养
直接培养法:(适于培养含纤维少的软组织)
1.在含有少量培养液或Hanks液的容器中,用锋利刀片将组织反复切割成碎块。
2.把组织碎块连同液体注入离心管中,再补加少许培养液,用吸管吹打片刻,
置试管架3~5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2~3次。
3.末次处理结束后,向沉降管中再补加培养液,用吸管稍吹打,使沉降物重悬。
不待细胞团块下降立即通过3~4层无菌纱布滤入另管中。
4.调整好适宜密度,接种入培养瓶中培养。
胶原酶消化法:(适于处理含纤维多的较硬组织)