ELISA试剂盒实验中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
根据技术分析,可能存在的原因有一下几条:
1、实验过程中洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留
解决办法:洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,*拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。
2、底物污染,未避光保存,出现颜色
解决办法:弃去底物,重新配置
3、样品稀释液污染
解决办法:弃去稀释液,重新配置
4、吸头重复使用,未洗净或消毒不*
解决办法:吸头尽可能一次性使用
5、没有正确封闭
解决办法:在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
6、样本溶血严重
解决办法:建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。
7、不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间)
解决办法:zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。*按照说明书要求
8、偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高
解决办法:按照说明书调整到合适的浓度
9、ELISA板子不正确的贮存
解决办法:酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板