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白三叶草花叶病毒(CMV)ELISA检测试剂盒实验操作步骤
更新时间:2020-02-26   点击次数:1072次

 白三叶草花叶病毒(CMV)ELISA检测试剂盒操作步骤

  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
  随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2.  灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 pmol/L。

3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

 

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