小鼠小扁豆素结合型甲胎蛋白简化的程序列表如下:
1、将一级抗体(未标记)与样品抗原一起孵育。
2、将抗体、抗原复合物添加到预先用相同抗原包被的96孔板中。
3、 通过洗涤板除去未结合的抗体。(样品中的抗原越多,与孔中的抗原结合的抗体越少,因此称为“竞争”。)
4、添加对一抗具有特异性并与酶偶联的二抗。小鼠小扁豆素结合型甲胎蛋白(AFP-L2) ELISA kit生物研究中心
5、添加底物,剩余的酶引发发色或荧光信号。
6、对于竞争性ELISA,样品抗原浓度越高,终信号越弱。
竞争性ELISA的主要事件是由原始抗原(样品抗原)和添加抗原执行的竞争性结合过程。与间接ELISA,三明治式ELISA和直接ELISA相比,竞争性ELISA的程序在某些方面有所不同。竞争法的简要操作步骤:
1)先加入特异性抗原,使抗原固定结合于载体表面;
2)加入梯度浓度比例的待测样品与酶标抗体混合物,并做只加酶标抗体的对照组;
3)加入酶促反应底物,发生显色反应,对比实验组及对照组的显色差异,计算未知抗体的量。