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乙醛脱氢酶(ALDH)操作步骤
更新时间:2021-07-07   点击次数:1875次

乙醛脱氢酶(ALDH)操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

2,4-D 10g/100g/250g原装
(2,4-二氯苯氧乙酸)
2,6-Dichlorophenolindophenol, 1g/5g/25g原装
(氯靛酚钠)
2’-Deoxy-D-Glucose 100mg/1g原装/5g原装
(2-脱氧-D-葡萄糖)
2’-Deoxy-D-Ribose 1g原装/5g原装/10g原装
(2-脱氧-D-核糖)
20XSSC溶液 100ml
(20XSSC溶液)
2-Thiobarbituricacid 10g/50g/100g原装
(2-硫代巴比妥酸)
3#Bilesalt 25g/1kg
(三号胆盐)
3-AT 5g/10g/25g/100g原装
4-Chloro-1-Naphthol 5g/10g/25g/50g原装
(4-氯-1-萘酚)
4-Methylumbelliferone 5g/10g/25g/100g原装
(4-甲基伞形酮)
5-Bromo-2'-Deoxyuridine 250mg/1g
(5-溴-2-脱氧尿苷)
6-(γ,γ-Dimethylallylamino) 25mg 原装
purineriboside(嘌呤核苷)
 

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