动物外周血淋巴细胞分离液的注意事项
细胞分离液使用的注意事项:
1.开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。
2.分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
3.血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2 h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。
4.稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。
5.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁影响分离效果。
6.血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。
7.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加;吸取过多的血浆层可能会导致淋巴细胞中血浆蛋白及血小板污染。
8.如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。
9.不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。