荧光PCR法是如何进行核酸检测的?
PCR实验室又叫基因扩增实验室,实时荧光定量PCR技术是DNA定量技术的一次飞跃,是用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。而荧光PCR法则是实现该项技术的载体,通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
PCR实验室其实功能极其强大,定性分析和定量检测是它最大的两个应用方向,在核酸检测方面的应用尤其突出,接下来德晟就给大家介绍一下PCR在病原体测定方面的应用,也希望通过这些示例可以让大家更清楚核酸检测的流程是怎样的。
示例:病毒核酸检测。
方法学:荧光PCR法。
用途:用于体外定性检测病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行病毒感染诊断或鉴别。
检测基因:病毒(2019-nCoV)ORFlab和N基因、E基因。
标本类型:上呼吸道标本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道标本:呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺组织活检标本。
检测流程:
(1)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)→(2)样本的灭活(56℃灭活30分钟)→(3)样本的核酸提取(手工、核酸提取仪)→(4)PCR体系的配制和模板加样→(5)上机检测及结果分析→(6)检测后的消毒。
其他病原体检测:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。
适合开展的医院和科室:儿童医院、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的医院。
PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。PCR检测方法具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。