探针法荧光PCR检测试剂盒的优势和测量原理
探针法荧光PCR检测试剂盒的荧光PCR是使用聚合酶链式反应(PCR)进行的核酸同步扩增和检测/定量的方法。
探针法荧光PCR检测试剂盒具有显著的优势，可以实现基因表达的精确定量。特异性好，大大降低了检测的假阳性，灵敏度高，采用灵敏的荧光检测系统对荧光信号进行实时监控，操作简单，无PCR产物污染。省去了最麻烦的基因序列查询、引物探针设计、PCR扩增条件优化等大量费时、费力、费钱的繁琐工作。探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题，反应结束后无需通过熔解曲线检测，缩短了实验时间。
探针法荧光PCR检测试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收。正常情况下两个基团的空间距离很近，荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时，引物与该探针同时结合到模板上，探针的结合位置位于上下游引物之间。当扩增延伸到探针结合的位置时，Taq酶利用5'外切酶活性，将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，因此，根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。
在线客服
