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鳃霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素
更新时间:2022-03-31   点击次数:615次

鳃霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素:


参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:


①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。


②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。


③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。


⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。


⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。


⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。


引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

AKIRIN2蛋白抗体

ADP核糖基化样因子8B抗体

三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗体

AKIRIN1蛋白抗体

锚定蛋白样蛋白1抗体

腺苷酸激酶2抗体

黑色素瘤缺失样蛋白1抗体

未知糖基化转移酶AER61抗体

铁蛋白Fe65抗体

抑癌基因ras同源家族1抗体

转录激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗体

心钠素抗体

丙氨酰tRNA合成酶2抗体

丝氨酸抑制蛋白激酶C底物抗体

核突触蛋白α抗体

自噬相关蛋白4B抗体

整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12抗体

α-辅肌动蛋白4(内参)抗体

碱性磷酸酶抗体

AU1 tag标签抗体

脂肪细胞增强结合蛋白1

蛋白激酶B

蛋白激酶B

血管生成素样蛋白2抗体

血管生成素3/血管生成素4抗体

膜粘连蛋白 I抗体

膜粘连蛋白 Ⅱ抗体

活化转录因子1抗体

水通道蛋白4抗体


 

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