中脑核仁蛋白抗体生物素化标记实验要点：

1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析；

2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件；

3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活；

4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等；

5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性；

6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合；

7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用；

8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

温馨提示：

在实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗

体，4二保存。回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心

1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长需长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

JNK相互作用蛋白4抗体

氨基末端激酶1/2抗体

氨基末端激酶1/2/3抗体

氨基末端激酶1/3抗体

连接蛋白JPH4抗体

组蛋白去甲基转移酶JMJD7抗体

磷酸化原癌基因c-Jun抗体

磷酸化活化蛋白激酶D抗体

磷酸化活化蛋白激酶B抗体

磷酸化活化蛋白激酶B抗体

磷酸化组蛋白去甲基化酶JMJD2B抗体

丝裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白2抗体

丝裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗体

磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗体

磷酸化蛋白质酪氨酸激酶JAK-1抗体

氨基末端激酶2抗体

连接介导调节蛋白抗体

氨基末端激酶3抗体

磷酸化活化蛋白激酶B抗体

JmjC结构域组蛋白去甲基化酶H3-K36抗体

组蛋白去甲基化酶JARID2抗体

JAK和微管相互作用蛋白2抗体

活化蛋白激酶B抗体

磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗体

凋亡细胞清除受体抗体

磷酸化原癌基因c-Jun抗体

Notch配体Jagged 2蛋白抗体