滤纸酶可见分光光度法检测试剂盒酶液提取:
1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,冰浴匀浆后于4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体40mL×1瓶,4℃保存。
滤纸条:50mg×50条。
测定原理
滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二**水杨酸生成红棕色氨基化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。
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