解析PCR鉴定试剂盒的优势、储存条件及注意事项
PCR鉴定试剂盒是一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,PCR鉴定试剂盒具有许多优点。
PCR鉴定试剂盒的特点优势:
1、特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%;
2、重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%;
3、灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程;
4、实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
储存条件:
14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离;
2、血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清;
3、细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物;
4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清;
5、保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR鉴定试剂盒注意事项:
1、PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室;
2、纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好;
3、所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套;
4、PCR试剂配制应使用最高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌;
5、试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性;
6、试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌;
7、PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。