探针法荧光定量RT-PCR试剂盒的准备工作及使用方法
探针法荧光定量RT-PCR试剂盒使用支原体污染PCR检测试剂盒，能在2到3小时内获得可靠的结果，是一种灵敏度高、特异性强、快速的检测支原体污染的方法。
探针法荧光定量RT-PCR试剂盒使用方法：
一、样品DNA的制备
.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 0μL PCR 阳性对照作为阳性对照，阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后，*得到 200μL 模板 DNA(每个样品)放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR(60 μL 体系)
3.样品管：在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 8 μL - - 阳性对照(纯化后) - 8 μL - 阴性对照(纯化后) - - 8 μL电泳检测
4.取 0-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳(本产品不需要单独加loading buffer)，*使用 00 bp DNA Marker，如果样品为阳性，将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。
二、探针法荧光定量RT-PCR试剂盒的准备：
待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。
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