本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
5pg/ml-100pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中抗精子抗体（AsAb）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中大鼠抗精子抗体（AsAb）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗精子抗体，再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗精子抗体（AsAb）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算
样品中大鼠抗精子抗体（AsAb）浓度。
试剂盒组成
1、30 倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2、酶标试剂6ml×1瓶8标准品（200pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3、酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4、样品稀释液 6ml×1瓶10说明书1份
5、显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6、显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
100pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
50pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
25pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
12.5pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
6.25pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6 个月