小鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
1pmol/L - 32pmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中三碘甲状腺原氨酸（T3）含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）水平。用纯化的小鼠三碘甲状腺原氨酸（T3）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入三碘甲状腺原氨酸（T3），再与HRP 标记的三碘甲状腺原氨酸（T3）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的三碘甲状腺原氨酸（T3）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠三碘甲状腺
原氨酸（T3）浓度。
试剂盒组成：
1、30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2、酶标试剂6ml×1瓶8标准品（64pmol/L）0.5ml×1瓶
3、酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4、样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5、显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6、显色剂B液6ml×1瓶12密封袋1个
标本要求：
1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2、不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
32pmol/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
16pmol/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
8pmol/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
4pmol/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
2pmol/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4、配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项：
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9、本试剂不同批号组分不得混用。
10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期：
1、试剂盒保存：2-8℃。
2、有效期：6 个月