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紫河车LAMP鉴定试剂盒使用方法
更新时间:2023-07-25   点击次数:424次

紫河车LAMP鉴定试剂盒使用方法:

一、样品采集:

1、食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。

2、血液样品:用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL,注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管,立即混匀。

3、粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。

4、病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)

1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DNA段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。 

二、DNA提取:

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。

1、液体培养物:取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。

2、固体培养物:挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。

3、粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

4、其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议在样品制备区域加入阳性对照。 

ANGL2血管生成素样蛋白2抗体

Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗体

Annexin I膜粘连蛋白 I抗体

Annexin A2膜粘连蛋白 Ⅱ抗体

ATF1活化转录因子1抗体

Aquaporin 4 水通道蛋白4抗体

ATF2活化复制因子2抗体

AMPK beta 1腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体

Amylin糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体

Angiotensin II血管紧张素Ⅱ抗体

AT2R血管紧张素Ⅱ受体1抗体

Angiopoietin-1血管生成素-1抗体

Annexin V膜粘连蛋白5抗体

Annexin V重组膜粘连蛋白5抗体

alpha Adaptin衔接蛋白α-Adaptin抗体

APAF1凋亡蛋白活性因子-1抗体

APAF1凋亡蛋白活性因子-1抗体

ABCG2三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体

APOE载脂蛋白E抗体

Amyloid Precursor Protein淀粉样肽前体蛋白抗体

Aquaporin 2水通道蛋白-2抗体

AGT血管紧张素原抗体

Androgen receptor雄激素受体抗体


 

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