(一)试剂及配制
1．饱和硫 酸铵液
2．各种磷酸盐缓冲液
⑴ 0.2mol/L原液
A液：0.20Mol/L NaH2PO4液
NaH2PO4·H2O 31.20g
H2O 1 000ml
B液：0.20Mol/L Na2HPO4液
Na2HPO4·12H2O 71.7g
H2O 1 000ml
⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB液
A液： 53ml
B液： 947ml
H2O 加至 2 000ml
⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB液
取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml，加H2O至2 000ml
⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB液
取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml，加水至2 000ml。
⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液
取0.10.1 Mol/L pH8.0 PB液700ml，加水至2 000ml。
⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB液
A： 920ml
B： 80ml
H2O 加至 2 000ml
⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB液
a液.0.40Mol/L NaH2PO4液
NaH2PO4·2H2O 62.40g
H2O 加至 1 000ml
B液.0.40Mol/L Na2HPO4液
Na2HPO4·12H2O 143.4g
H2O 加至 1 000ml
取a液 960ml
b液 40ml
混合即可。
⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS液
取0.10Mol/L pH8.0 PB液 100ml
NaCl 8.20g
H2O 加至 1 000ml
3．DEAE-纤维素(细粒级)
4．SephadexG200
(二)操作方法
1．取一定量的血清，加等量的生理盐水，然后逐渐滴加饱和硫 酸铵溶液，使成40％的饱和度,静置30min。
2．10 000r/min离心10min，去上清。
3．加入一定量的生理盐水，使沉淀溶解，再加入饱和硫 酸铵溶液，使成40％饱和度。10 000r/min离心10min，去上清。
4．再重复步骤3一次。
5．将沉淀以少量生理盐水溶解，透析，除盐浓缩。
6．制备DEAE-纤维素柱，以0.005Mol/L pH8.0PB液平衡。
同时制备SephadexG200凝胶柱，以0.01Mol/L pH8.0PBS液平衡并进行洗脱。
7．以0.005Mol/L pH8.0PB液洗脱，得蛋白液为IgG。
7． 以0.025 Mol/L pH8.0PB液洗脱，得蛋白主要是IgE，再过SephadexG200凝胶柱，收集*峰即为纯IgE。
8． 以0.035 Mol/L pH8.0PB液洗脱，得蛋白主要是IgA，再过SephadexG200凝胶柱，收集*峰即为纯IgA。
10．以0.10Mol/L pH5.8PB液洗脱，洗脱液主要有IgM、IgG及白蛋白的混杂物。
11．以0.40Mol/L pH5.2PB液洗脱，得蛋白液主要是IgM。过SephadexG200，收集第二峰即为纯IgM。