柱式全血RNAout
产品及特点 本产品经过天泽基因精心优化而得,多项指标超过国内外同类产品。本产品是天泽基因在血液RNAOUT(CAT#:3071)基础上开发的柱式升级产品,专门从动物全血样品中快速提取总RNA。跟血液RNAOUT相比,本产品具有下列特点:
1. 比血液RNAOUT更加简单快捷,直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,不需裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 产量和纯度更高,OD260/280均在2.0左右,产率一般为2-5 ug/mL人血。
3. 每次微量提取的zui大样品处理量可以达到1.5 mL,高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容,得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
规格及成分 成 份 50次包装
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 50 mL
离心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脱液 10 mL
使用手册 1份
运输及保存 常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1. 将0.2-1.5 mL新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL塑料离心管中。
2. 12000-15000 g室温离心3分钟,弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2 mL, 则需要减少血液的使用量,具体减少量需根据具体情况决定,因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
3. 将1 mL溶液A加入到血液细胞沉淀中,用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将0.3 mL的溶液B加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
5. 和0.2 mL氯仿加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
6. 12000-15000 g室温离心3-5分钟,将上清液(为无色或浅红色,约0.5-0.9 mL)转移到另一干净离心管中。注意:转移的液体不要超过0.7 mL,否则下一步不能加入等体积的溶液C。为防止污染,留100 uL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
7. 加入等体积的溶液C,充分颠倒混匀。
8. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中,每次转移后12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 加0.7 mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
10. 如果有必要,可以再加0.3 mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。注意:增加此步可以进一步提高RNA的纯度。
11. 室温12000-15000 g离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一个RNase-free的收集管中,加入50-100 uL RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。
13. 12000-15000 g室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
15. RNA产量产率测定:将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40 μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5 ug/mL。
16. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。