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RNA电泳液
更新时间:2013-06-27   点击次数:1183次

RNA电泳液
产品及特点
本产品是预配的10 X RNA电泳液(即10 X MOPS电泳液),专门用于
RNA电泳分析。
1. 即开即用,用户不需要自己进行RNase灭活、高压灭菌、pH调节等操作。
2. 与Northern杂交等后续反应兼容。
规格及成分
成 份
100 mL包装
(3150-100)
RNARUN 100 mL
使用手册 1份

运输及保存 常温运输,4℃保存。
自备试剂 琼脂糖、37%甲醛、EB (10 mg/mL)、去离子甲酰胺。
使用方法
一、用本产品配制琼脂糖甲醛变性胶(1.2%, 100 mL)
1. 在三角瓶中加入下列成份:
琼脂糖 1.2 g
DEPC水 87 mL
2. 将琼脂糖加热融化后,加入10 mL本产品。
3. 待胶冷却至60 °C左右,再加下列成份:
37%甲醛 3.0 mL
EB (10 mg/mL) 2-4 μL
4. 混匀后倒胶, 凝固半小时后即可以使用琼脂糖甲醛变性胶(需要量
RNA变性上样液和RNA电泳液)。

二、用本产品配制RNA变性上样液(以一个RNA样品为例)
本产品 2.0 μL
37%甲醛 3.5 μL
去离子甲酰胺 10.0 μL
RNA样品 4.5 μl
于85° 变性10 min,冰浴冷却5分钟后加上样液(可以使用普通的6
X DNA上样液)后直接上样。

三、用本产品配制RNA电泳液
将本产品用无RNase的水稀释十倍后即可直接用于RNA的琼脂糖甲醛
变性胶使用。

四、电泳条件
电泳时,将凝胶预电泳5 min(电压为5 V/cm)。随后加样品和分子
量对照(如果有的话),以 3-4 V/cm 的电压电泳,直至溴酚蓝迁移至
胶下游的3/4处。电泳结束后,在紫外灯下拍照。

【注意事项】
每一泳道至多可分析 30 μg RNA,通常用 10-20 μg 总 RNA 进行
Northern杂交,可以检测高丰度mRNA(占mRNA总量的0.1%以上);
如待测RNA含量极微,每个泳道需加0.5-3.0 μg poly(A)+ RNA。
溴酚蓝泳动速度相当于300bp DNA,二甲苯青FF泳动速度相当于4
Kp DNA。

 

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