研生试剂-果蝇类免疫染色的特殊性

         elisa试剂盒免疫组化染色的标准程序可以用于对果蝇类抗原的定位。一般而言，果蝇类标本染色的成功与否依赖于本章开始和第五章所讨论的原则。果蝇类标本免疫染色的复杂性在于其不同发育阶段出现不同的保护衣壳，包括以下结构：绒毛膜、卵黄膜和角质层。它们均是特定阶段的自身环境保护屏障，在发育和生存中起着重要的作用，就方法而言，去除这些结构有利于抗体的透入，且不应改变所研究的抗原特性。因此，在设计果蝇类标本免疫染色的方案中应该考虑使背景降至zui低的程度，对抗体的选择尤其关键。

             elisa试剂盒果蝇类标本免疫染色的方法可以分为两个步骤。*步为处理标本，包括固定和透化处理组织或整个器官。要求处理条件强烈，以便去除果蝇类的保护衣壳、固定抗原以及有利于抗体透入。固定和透化方法的选择可依据果蝇类发育的不同阶段而定。在形成角质层前的胚胎早期，可用有机溶剂、甲醛和醇类的混合物固定和透化组织，以便抗体易于透入。正常情况下超声处理可以打开角质层。本章介绍的固定方法包括整个胚胎发育的早期和晚期。来自发育晚期的组织通常先被破碎成碎片，然后按标准的多聚甲醛／去污剂法固定和染色。

    果蝇类标本染色的第二步是加入一抗及检测。一抗的加入及检测与后续的二抗染色有关，但仅有一点不同的是在zui后染色中取决于所需分辨水平。大多数抗原定位实验使用酶标记的二级试剂。这种方法灵敏度高，并且不需要共聚焦显微镜。如要求更高的分辨率或需在同一样本中观察两种抗原时，则采用荧光染料标记的二抗试剂。由于果蝇类标本较厚，要求使用共聚焦显微镜观察染色结果，且依赖于良好的共聚焦设备。以下分别讨论这两部分技术。