ELISA试剂盒测定中单个空缺孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性,也就是说每次测定或同次测定空缺孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值,所以在ELISA测定比色时,是使用双波长比色。ELISA试剂盒因此,双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的长处。ELISA试剂盒比色结果的表达以往通用光密度(oplical density,OD),现按划定用吸光度(absorbence,A),两者含义相同。
zui后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。以软板为载体的试验,需先将板置于尺度96孔的座架中,才可进行比色。ELISA试剂盒比色时应先以蒸馏水校零点,测读底物孔。
所谓的单波长比色等于通常的以对显色具有zui大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定;而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长630nm下各测定一次,敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和;非敏感波长下测定即改变波长至一定值,ELISA试剂盒使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零,此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。
在没有细胞竞争的情况下,当新骨髓祖细胞的流入在小鼠体内被阻断时,老细胞就会重新获得自我更新并zui终被改变的能力,导致“T-细胞急性淋巴细胞性白血病”(T-ALL)的发生,ELISA试剂盒与人类的这种白血病相似。
与此同时,基因表达会发生变化,也会出现经常在人类T-ALL中所见到的基因突变。因此,细胞竞争会充当一个“肿瘤抑制因子”机制。ELISA试剂盒这项研究也许还能帮助解释用基因矫正过的自体祖细胞治疗之后在“与X相关的严重联合免疫缺陷”患者身上所看到的、被广泛讨论过的T-细胞白血病。