细胞培养基传代转让方法及分析色谱技术

细胞培养基传代转让方法：

    (1) 、细胞培养基试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。

　　(2) 、弃掉培养基皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。

　　(3) 、用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟（37。C，5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞*从壁上脱落下来为止。

　　(4) 、加入1ml的含血清培养基终止反应。

　　(5) 、用Tip头多次吹吸，使细胞*分散开。

　　(6) 、将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。

　　(7) 、用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

　　(8) 、将合适体积*培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

　　(9) 、将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。 

    细胞培养基分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上取得了良好的分离效果时，可以将其放大，应用到制备色谱上，由此，我们需要考虑调整上样量，流速，梯度。

　　1、上样量的调整：他与分析色谱柱和制备色谱柱的柱长和柱内径有关：

　　具体关系时;制备柱上样量/分析柱上样量=制备猪场/分析柱长*制备柱内径的平方/分析柱内径的平方。

　　2、流速的调整：

　　制备柱流速/分析柱流速=制备柱体积/分析柱体积=制备柱长/分析柱长*制备柱内径的平方/分析柱内径的平方。

　　3、梯度的调整：

　　制备柱梯度/分析柱梯度=制备柱体积/分析柱体积*制备柱流速/分析柱流速。