技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > ELISA试剂盒揭示蛋白质纯化与结晶的培养原理
ELISA试剂盒揭示蛋白质纯化与结晶的培养原理
更新时间:2014-10-10   点击次数:735次

ELISA试剂盒揭示蛋白质纯化与结晶的培养原理

     获得蛋白质的晶体结构的*个瓶颈,就是制备大量纯化的蛋白质(>10mg),其浓度通常在10mg/ml以上,并以此为基础进行结晶条件的筛选。运用重组基因的技术,将特定基因以选殖(clone)的方式嵌入表现载体内,此一载体通常具有易于调控的特性。之后再将带有特定基因的载体送入可快速生长的菌体中,如大肠杆菌,在菌体快速生长的同时,也大量表现载体上的基因所解译出之蛋白质。一般而言纯度越高的蛋白质比较有机会形成晶体,因此纯化蛋白质的步骤就成为一个重要的决定因素。

    在取得高纯度的蛋白质溶液后,接下来就是晶体的培养。蛋白质晶体与其他化合物晶体的形成类似,是在饱和溶液中慢慢产生的,每一种蛋白质养晶的条件皆有所差异,影响晶体形成的变量很多,包含化学上的变量,如酸碱度、沉淀剂种类、离子浓度、蛋白质浓度等;物理上的变数,如溶液达成过饱和状态的速率、温度等;及生化上的变数,如蛋白质所需的金属离子或抑制剂、蛋白质的聚合状态、等电点等,皆是养晶时的测试条件。截至目前为止,并无一套理论可以预测结晶的条件,所以必须不断测试各种养晶溶液的组合后,才可能得到一颗的单一晶体。

    蛋白质晶体的培养,通常是利用气相扩散法(Vapor Diffusion 
Method)的原理来达成;也就是将含有高浓度的蛋白质(10~50mg/ml)溶液加入适当的溶剂,慢慢降低蛋白质的溶解度,使其接近自发性的沈淀状态时,蛋白质分子将在整齐的堆栈下形成晶体。举例来说,我们将蛋白质溶于低浓度(~1.0M)的硫酸铵溶液中,将它放置于一密闭含有高浓度(~2.0M)硫酸铵溶液的容器中,由气相平衡,可以缓慢提高蛋白质溶液中硫酸铵的浓度,进而达成结晶的目的。

    蛋白质晶体在外观上与其他晶体并无明显不同之处,但在晶体的内部,却有很大的差异。一般而言,蛋白质晶体除了蛋白质分子外,其他的空间则充满约40%至60%之间的水溶液,其液态的成分不仅使晶体易碎,也容易使蛋白质分子在晶格排列上有不规则的情形出现,造成晶体处理时的困难及绕射数据上的搜集不易等缺点。但也由于高含水量的特性,让蛋白质分子在晶体内与水溶液中的状态,极为相似。所以由晶体所解出的蛋白质结构,基本上可视为自然状态下的结构。

250克    Bile Esculin Azide Agar    胆盐七叶苷叠氮钠琼脂    用于肠球菌的快速选择性分离培养和计数
250克    M-Enerococcus Agar    M-肠球菌琼脂    用于滤膜法或直接平板法,从自来水、食品或其他标本中分离肠球菌
250克    BPW    缓冲蛋白胨水增菌液    沙门氏菌前增菌培养和李氏菌前增菌培养
250克    TSYEB    胰酶大豆酵母浸膏肉汤    用于单核细胞和李斯特菌增菌培养
250克    TSYEA    胰酶大豆酵母浸膏琼脂    用于单核细胞和李斯特氏菌的分离培养
250克    Listeria Enrichment Broth Base    李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础    李氏菌二步增菌
250克    PALCAM Agar    PALCAM琼脂    单增李氏菌的选择性分离
250克    Oxford Agar Base    OXA基础    单增李氏菌的选择性分离
250克    LPM Agar    李氏LPM琼脂    单增李氏菌的选择性分离
250克    Half Fraser Medium    Half Fraser培养基    李氏菌的增菌培养
250克    Motility Test Medium(Semisolid)    SIM培养基    李氏菌动力观察,H抗原位相变异试验;硫化氢、动力、吲哚试验
250克    Modified Mcbride Agar Base    改良McBride琼脂培养基    单增李氏菌选择性分离
250克    Fraser Medium    Fraser培养基    李氏菌的增菌培养
250克    MBPW    改良缓冲蛋白胨水    李氏菌的增殖
250克    Citrate Agar    柠檬酸盐培养基    大肠杆菌和产气杆菌的鉴别
250克    Urease Agar Base    尿素琼脂培养基基础    细菌脲酶检测,肠杆菌鉴别
100克    Potassium Cyanide Medium Base    KCN培养基基础    用于鉴别肠道细菌KCN抑制试验
250克    MR VP Broth    MR-VP试验用培养基    肠杆菌科细菌的甲基红和VP试验

 

化工仪器网

推荐收藏该企业网站
Baidu
map