病毒转化细胞实验

(1)原理：很多病毒都有转化细胞的作用，尤以致癌病毒zui为明显。EB病毒(EBV)是近年来常用于转化细胞的病毒。该病毒对人二倍体细胞的转化效果，常用于建立淋巴细胞永生细胞系。人外周血B淋巴细胞膜上有。EB病毒受体，当EB病毒与受体结合后，B淋巴细胞可发生转化，成为体外长期传代生长的细胞系。

(2)材料

1)病毒：EB病毒液(取自培养的B95—8细胞)。

2)转化细胞：柠檬酸或肝素抗凝人外周血。

3)细胞培养液：含20％胎牛血清的RPMI 1640。

4)抗生素：青霉素、链霉素和庆大霉素。

5)洗液：PBS。

(3)方法

1)血液制备：抗凝全血1～2ml，分装于15ml离心管中，每管O．5ml，置于4℃冰箱中放置30min后，加入不含血清的RPMI1640离心洗一次，用含20％胎牛血清的细胞培养液制成细胞悬液。

2)EB病毒的获得：培养的B95—8细胞，10000r／min离心15min去除细胞碎片，再经24000r／min，离心90min获得病毒沉淀，以1：100体积培养液溶解获得EB病毒浓缩液。

3)EB病毒转化：加入EB病毒液，O．3～0．5ml／管，37℃水浴30min～2h，并不时摇动，以利于病毒吸附和并防止血凝块产生。

4)分装入50ml培养瓶中，同时补加培养液，5ml／管，置入含5％CO2的37℃温箱中培养。

5)细胞培养一周后再补入2ml培养基。

6)每3～4d加液或半量换液，随细胞数量增多，可分装人大瓶中培养。为了提高转化效率，常将全血冻存复苏后采用。

(4)结果观察与鉴定：需每天镜检培养物，开始培养时，镜下可见大量红细胞，难以观察到单核细胞。培养5～7d后，单个或成团的淋巴细胞增殖迅速，成大团块，呈悬浮生长，红细胞已*消失，转化完成。