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酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定
更新时间:2015-12-02   点击次数:826次

酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定

    凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由ELISA法检测。

(一)检测步骤

1、将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;

2、在微定量板上吸附组蛋白体’

3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘

4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’

5、加酶的底物,测光吸收制。

(二)用途

    该法敏感性高,可检测5*100/ml个凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器,适合基层工作,但是不能测定凋亡细胞发生的绝多对量。

流式细胞仪定量分析

(一)检测原理

    细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。

(二)应用价值

流式细胞仪检测具有以下特点:

1)、检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确

2)、可以做许多相关性分析

3)、结合被检测细胞的DNA含量的分析,可确定凋亡的细胞所处的细胞周期

 

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