(一)原理

   以NK细胞为例。将待测者外周血中的NK细胞与靶细胞(K562细胞)按一定比例混合培养一定时间，NK细胞作用于靶细胞，使靶细胞被杀死、破坏，进而使靶细胞线粒体内的乳酸脱氢酶释放出来．使底物发生颜色变化，其颜色深浅与酶的释放量成正比，检测显色后的光密度OD值，便可推算出NK细胞的杀伤活性。

(二)材料

1．待检者肝素抗凝血，靶细胞为K562细胞。

2．RPMI 1640培养液、淋巴细胞分离液。

3．酶标仪、离心机。

(三)方法

1．用含5％小牛血清的RPMI 1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105／ml，此浓度需根据情况预先标定。

2．取待检者肝素抗凝血3～5ml，经淋巴细胞分离液分离单个核细胞，为效应细胞。

3．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞．只加100μl培养液。

4．向各孔加：100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例根据要求而定，通常为5：l～20：1。自然释放孔不加效应细胞只加100μl培养液，zui大释放孔中加100μl1％NP40。每个实验设3个复孔。

5．置37℃5％CO2的培养箱中培养4～6h。

6．离心培养板1000r／min离心10min。每孔吸出150μl上清液．对应加入另一块96孔酶联检测板中。向第二块板每孔依次加20μl O．4mol／L乳酸溶液、20ml 4mmol／L 2一p一碘苯酯一3一p一氯化硝基苯四唑，20μl反应液[含O．03％BSA．2．7U／m1硫辛酰胺脱氢酶．4．5mmol／L氢化型辅酶I(NAD+ )，1．2％蔗糖的PBS]，室温中放置20min。

7．在酶联检测仪上测定各孔的光密度(OD值)，检测波长492nm，参考波长650nm；