(一)原理
葡萄糖一6一磷酸酶(glucose-6-phosphatase)是滑面内质网的标志酶。葡萄糖6一磷酸酶是糖异生途径的关键酶,其转录的多少,决定着糖异生的速度。ELISA试剂盒
(二)材料
1.标本组织切片。
2.Tris一马来酸缓冲液(pH6.5)
(1)A液:取Tris1.2g、马来酸1.16g,溶于100ml蒸馏水中。
(2)B液:0.2mol/LNaOH溶液(将0.8gNaOH溶于lOOml蒸馏水即成)。取A液25ml,B液约20ml,调pH至6.5后,加蒸馏水至100ml。
3.工作液须于用前现配,如有沉淀,应过滤。其配制方法为:0.125%D一葡萄糖一6一磷酸钠盐或钾盐20ml,0.2mol/L Tris一马来酸缓冲液(pH 6.5)20ml,3%醋酸铅3ml,蒸馏水7ml。
4.0.1mol/L磷酸缓冲液(含3%多聚甲醛)。ELISA试剂盒
(三)方法
1.用含3%多聚甲醛的o.1mol/L磷酸缓冲液于4℃固定组织切片标本2min。
2.用蒸馏水洗5次,各2min。
3.置于工作液中,37℃孵育15~20min。
4.用蒸馏水洗2次,各2min。
5.其余步骤同酸性磷酸酶染色步骤7~10。
6.对照设立对照的方法有两种:①在作用液中不加反应底物。②用口甘油磷酸钠代替底物。
(四)结果
酶活性部位有棕黑色沉淀,对照标本无此沉淀。ELISA试剂盒