鸣胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点，使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。

一，材料

1.孵育10d鸡胚2只。

2．培养用液含10％CS的MEM、O．25％胰酶、PBS、D—Hanks液、CS等。

3．器皿与仪器镊子、眼科剪、各种吸管、培养瓶、显微镜、培养皿、三角烧瓶、离心管、不锈钢网、细胞计数器等。

二、方法

1．取鸡胚取10d鸡胚于蛋架上，用75％乙醇消毒蛋壳，用剪刀和镊子去除气室部蛋壳，用无菌弯头小镊轻轻取出鸡胚，并放人无菌平皿中。

2．组织处理用弯头小镊夹起腹部皮肤，剪开腹腔和胸腔去除鸡胚内脏，留下的鸡胚组织用Hanks液洗2次。然后将鸡胚组织移人小三角烧瓶内，用剪刀反复剪成lmm3大小的组织块，用Hanks液洗2次。

3．消化将洗液上清液吸弃，根据沉下鸡胚组织块的多少，加入10倍量的O．25％胰酶，置37℃水浴中消化30min，消化时每隔5min摇动一次，使组织块散开，视其组织碎块变的疏松，从水浴锅中取出。用毛细管轻轻吸出消化液，用Hanks液洗3次，加10ml生长液(不加血清)，用吸管反复吹打，使细胞分散，然后将分散好的细胞悬液通过不锈钢网·补足10％CS或加10％FBS，制成细胞悬液。

4．细胞计数与分装取上述获得的单细胞悬液少量，进行1：5稀释后计数，然后调细胞浓度为O．5×106／ml，分装于培养瓶内。待细胞培养有一定经验后，可省略细胞计数步骤，而凭经验估计细胞浓度，如一只10日龄鸡胚制成lOml细胞悬液时细胞数约为4×106／ml，也可视其悬液的透明度来估计。

三、结果观察

    将上述培养物置37℃孵箱内培养，每天对培养接种的细胞进行常规检查，观察的主要内容有：细胞生长状态、污染与否、pH等。如培养液为橘红色，一般说明细胞生长良好。一般于24h后可见到许多细胞贴壁，由圆形悬浮状态的细胞延展成短梭形。2～3d后长成单层细胞，换维持液后即可用于实验，或经传代后再长成单层细胞时使用。

四、注意事项

    消化时温度不能高于37℃，消化时间不宜过强。如果胰酶消化过强，则细胞易被损伤不宜生存。