(一)培养基的制备方法

1．选定培养基配方，制备培养基记录

    首先查阅资料，确定培养基的配方，同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量搜集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。检查配制培养基所用的材料、试剂是否齐全，数量及质量(纯度、期限)是否合格；同时还要准备好配制培养基所用的各种设备和装置。微生物检验实验室需要经常配制不同种类的培养基．有必要建立培养基的制备记录。记录主要包括培养基名称、配方、试剂来源及批号、培养基zui终pH值、灭菌条件、制备的日期、制备者等内容，原始记录保存备查．还应复制一份记录随制好的培养基一同存放．以防发生混乱。

2．培养基成分的称取

    配置培养基所用的化学药品均应该是化学纯的，一般可用1/100的天平称量．根据培养基的配方计算出各成分用量．进行准确称量。培养基的各种成分必须注意防止错乱，一次完成，不要中断。可将配方置于旁侧，每称完一种成分即在配方处做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。*称取完毕后，还应进行一次检查。称量好的药品放人适当大小的烧杯中．琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。加入的一般培养基配方用1000mI。培养基中所含各种成分的质量(g)来表示。配制时应先估计实际需要培养基的用量．然后按比例计算各种药品的用量。

3．加热溶化培养基

    用量简取一定量(占总量的1／2～2／3)的蒸馏水，倒人盛有药品的容器(搪瓷缸、不锈钢锅或烧杯)中，不得使用铁锅、铜锅，以防有微量铜或者铁混入培养基中+使细菌不能生长。把容器在放有石棉网的电炉上小火加热．并用玻棒搅拌．以防液体溢出或者焦化。如果发生焦化现象则需要重新配置培养基。待各种药品*溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌．然后加足水分及其他原料，待*溶化后，补足水分；

    溶化琼脂时如需制成固体培养基，应在已配好的液体培养基呈沸腾状态下加入1．5％～2．0％琼脂条(用剪刀切碎)或琼脂粉，并用玻棒不断搅拌，同时注意控制火力．以免糊底烧焦及防止溢出。继续加热至琼脂全部溶化．zui后补足因蒸发而失去的水分。或者将琼脂单独溶化30min，用一部分水溶化其他成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，zui后必须补足。在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1．5％～2．0％的量将琼脂直接加入各三角瓶中．不必加热溶化；而是灭菌和加热溶化同步进行．以节省时间。

4．调节pH值

    因培养基在加热消毒过程中，pH值会有所改变．培养基各成分充分溶解后，应进行pH值的初步调整。例如．牛肉浸液约可降低pH值0．2．而肠浸液pH值却会有显著的升高。因此．对这个步骤，操作者应随时注意探索经验，掌握培养基的zui终pH值，保证培养基的质量。

    取适当范围的精密pH值试纸一小条，用玻璃棒蘸取少许待测培养基滴在试纸上，与比色板对照颜色，测定所配培养基的pH值。如培养基偏酸或偏碱时一可用1mol／LNaOH溶液或1mol／L HCl溶液逐滴缓慢加入，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测·直至达到所需pH值范围为止。pH值的调节通常放在加琼脂之前，pH值调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利于培养基沉淀物的析出．另外调节pH值时应注意以下几点问题：

①培养基必须冷却至室温时才可调节pH值。

②加酸或碱溶液时．要缓慢少量加入，并多加搅拌，防止局部过酸或过碱而破坏培养基中营养成分。

③pH值一次调成功，否则回调会影响培养基内各离子的浓度。

④配制pH值低的琼脂培养基时，若预先调好pH值并在高压蒸汽下灭菌．则琼脂因水解不能凝固。因此．应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH值条件下灭菌．再调整pH值。

⑤有些微生物要求pH值较．可用酸度计调节培养基的pH值。