CD34是目前较为*的干细胞的表面标志,故一般将CD34抗原作为干细胞分离纯化的主要标志。
1.骨髓及外周血CD34十细胞的阳性富集
利用各种方法分选出CD34十细胞,具体方法。
2.骨髓及外周血CD34十细胞的阴性富集
利用各种方法去除成熟的血细胞及免疫活性细胞,从而达到造血干/祖细胞的富集,即为阴性富集。由于骨髓、外周血中各种细胞成分的密度及比重不同,使用密度梯度分离可将其分成不同组分,在低密度层中含有富集的造血干/祖细胞。
3.脐血干细胞的纯化
目前常用的脐血造血干/祖细胞的分离纯化方法概括起来有以下几种:①Fi-cOH、PerOll密度梯度离心法。脐血干/祖细胞主要集中于低密度组分中,但此方法操作开放,易污染。②三联袋离心法。此法可去除59%红细胞,体积减少56%,CD34十细胞回收率为87%。③甲基纤维素、明腔、淀粉等方法。Mahman等发现明胶对造血祖细胞回收率zui高,集落形成细胞(CFC)、CD34十细胞的回收率分别为92%和86%。④流式细胞技术分选法。该法分选的CD34十细胞及其亚群细胞的纯度可高达95%99%,是目前分选CD34十细胞纯度zui高的方法,但费用昂贵,产率并不高,很难保持无菌。⑤免疫磁珠法。是用包被有单克隆抗体的磁性微粒特异性地与靶物质结合,通过外加磁场的作用使结合有靶物质的磁球被滞留,从而达到对靶细胞纯化分离的作用。其CD34十细胞含量及回收率,分别为90%~99%及65%~75%。