（一）检测杂交的蛋白

    这项试验zui后的步骤是检测能够特异性地和已经固定在膜上的样品蛋白发生相互作用的探针蛋白。为了得到的结果，我们应该尽可能的取得信/噪比zui大的结果，也就是说，我们需要在得到尽可能强的结果的同时尽可能避免背景的产生。根据我们的经验，非特异性背景结果的显现和曝光时间是成线型关系的。ELISA试剂盒

具体步骤：

1.将印迹有蛋白的硝酸纤维素膜加上增强化学荧光显影剂，孵育60s。

2.将过量的增强化学荧光显影剂从膜上吸去，并将硝酸纤维素膜铺放于清洁塑料膜上（比如保鲜膜）。

3.将塑料膜平整放入自显影片盒中。

4.进入暗室，将一张底片放于放射自显影片盒中与印迹膜及塑料膜叠放后盖上片盒。

5.根据*次结果信号的强弱调整压片曝光的时间，一般为5--20s。ELISA试剂盒

6.在标准的洗片机中冲洗胶片。

    出于安全的考虑，很多时候研究人员也会采用抗GST的抗体来检测探针是否能发生与待测蛋白的相互作用。但是由于容易发生假阳性，所以必须在蛋白印迹的清洗步骤中反复摸索出合适的条件。在zui后显色时，也要争取的信/噪比。

（二）膜结合蛋白的再折叠（选用）

    由于被印迹到膜上的蛋白质经过了很多步骤，往往自身已经失去了自然状况下的构象，或者在其被原核表达的过程中，得到的蛋白就已经是以错误的折叠方式存在。这种情况下会出现我们所不愿意看到的假阴性结果。为了zui大可能的避免这种假阴性，在没有出现阳性结果的时候，有时候我们需要采用再折叠的方法对膜结合蛋白进行处理。

具体步骤：

1.在蛋白转膜以后用50ml的变性缓冲液在4℃轻轻震荡清洗有蛋白印迹的膜10min。注意，变性缓冲液要*覆盖到膜的各个部位。

2.从容器中去除25ml变性缓冲液，按照1∶1比例加入碱性缓冲液进行稀释，再将膜放入后4度轻轻震荡洗涤带有蛋白印迹的膜10min。

3.重复以上步骤4遍。ELISA试剂盒

4.进入上述杂交的程序，视结果而决定是否还需要进一步的重复本步骤。