全血RNAout
产品及特点 本产品是天泽基因自主开发的,专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒,主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA需使用病毒RNAout, 提取纯化后的白细胞RNA可使用动物RNAout)。本产品经过天泽基因科技人员精心优化而得,多项指标超过国内外同类产品。
1. RNA无明显降解和DNA污染, OD260/280均在1.9以上。血液RNA的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系,人全血产量为2-6 μg/mL,兔全血产量为5-10 μg/mL。
2. 操作简单,直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,不需裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十多分钟,可以全在室温下进行。
3. 处理量大,每管的样品处理量可以达到1.5 mL,高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容,得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
规格及成分 成份 50次包装 250次包装
溶液A 50 mL 250 mL
溶液B 15 mL 75 mL
溶液C 25 mL 125 mL
溶液D 25 mL 125 mL
使用手册 1份 1份
运输及保存 常温运输,4℃保存,溶液B和溶液C有腐蚀性。4℃保存的溶液A可能会产生白色沉淀,用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。
自备试剂 氯仿,异丙醇,75%乙醇,RNA溶解液(如液相RNase清除剂)。
使用方法 1. 将0.2-1.5 mL新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL塑料离心管中, 15000 g室温离心3分钟,弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2 mL, 则需要减少血液的使用量,具体减少量需根据具体情况决定,因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取 0.1 mL以下的微量血液样品加入天泽基因的微量助沉剂RNADOWN。
2. 将1 mL溶液A加入到血液细胞沉淀中,用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
3. 将0.3 mL的溶液B和0.2 mL氯仿加入离心管,剧烈震荡30秒。
4. 13000-15000 g室温离心5分钟,将上清液(为无色或浅红色,约0.5-0.9 mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染,留100 uL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
5. 加入0.5 mL的溶液C和0.2 mL的氯仿到上清液中,用手上下剧烈摇晃30秒。
6. 13000-15000 g室温离心3分钟,将上清液(无色,约1 mL)转移到另一干净离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200 uL的方式分批转移。
7. 在上清液中加入1/2体积的溶液D,用手上下剧烈摇晃30秒,溶液将呈白色浑浊状。
8. 13000-15000 g室温离心5-30分钟,小心移弃上清液,避免触及管底大量的白色RNA沉淀。
9. 在离心管中加入1 mL 75%乙醇,振荡器上振荡混均30秒。室温离心13000-15000 g 1分钟,RNA此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
10. 重复第9步的75%乙醇清洗步骤一次。
11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50 uL),用移液枪小心吸弃,注意不要吸弃沉淀。此步十分重要,因为残留的乙醇会影响后续反应。
12. 室温短暂放置2分钟,立即加入适量(一般为10-30 μL)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase功能的新型RNA溶解液液相RNase Erasol而不要使用经典的DEPC水。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用,也可以存放于-80℃长期保存。