ELISA试剂盒HIV抗体检测操作要点

    ELISA试剂盒HIV抗体检测是发现HIV感染的有效途径，ELISA法是艾滋病初筛试验室检测HIV抗体普遍使用的方法之一。具体操作过程中ELISA法的影响因素较多，稍有不慎就会降低实验的准确性。避免诸多影响因素、保证结果准确性，才能够充分发挥ELISA法的优点，经过多次实验的总结和分析，这篇文章分享了相关的经验。

1 试剂的选择
通常所使用的ELISA试剂盒或其它试剂，必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、临床评估质量优良，并且均在有效期内使用。不同批号试剂组分不得混用，过期的试剂一律不得使用，首先提升实验结果的可信度。

2 ELISA试剂盒样品的采集与保存
用于检测的标本应保持新鲜，标本的采集应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质，干扰结果，会出现假阳性；标本如果受细菌污染，会因菌体中含有内源性过氧化物酶而出现假阳性；混浊或有沉淀的血清样品应离心，待澄清后方可检测，避免对结果造成影响。
用于HIV抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20 ℃以下，短期（1周内）进行检测的样品可存放于2 ℃～8 ℃。融解时应上下颠倒充分混匀，动作要轻缓，避免产生气泡。同时应注意避免样品反复冻融，否则会造成样品抗体效价降低，影响其结果。

3 加样
加样前应注意将微孔板条从冷藏环境中取出放置室温，待试剂平衡后方可使用，未用完者需放入有干燥剂的密封袋中保存。整个HIV抗体检测必须符合《全国艾滋病检测技术规范》，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。
加样要用微量移液器（要求准确性高并定期进行校正），按规定的量加入孔内，避免加在孔壁的边缘，垂直加样，不要使吸头碰到酶标板孔上的已包被的抗原，加样时尽量慢吸快放，同时注意不要溅出，避免产生气泡。
每次加样都要更换吸头，做到一样一吸头，防止发生交叉污染，干吸头预先在血清中抽吸3次，以便保证加样量的准确性。滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去*滴后再进行滴加，以免产生气泡。

4 ELISA试剂盒温育
抗原抗体反应需要在一定的温度下（zui适温度为37 ℃），经过一定的时间才能达到反应的平衡点。温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水育法，一种是放在水育箱的隔板上，另一种是放在温箱的湿盒内，水要浸至板条的1/3处，不可将板条叠加放置，以保证各板的温度平衡一致。

5 洗板
由于待检血清中可能有HIV病毒的存在，采用ELISA法进行检测HIV抗体时，尽量使用洗板机洗板，一方面可以确保检测人员的安全，另一方面可以防止环境污染。洗板在ELISA检测中是一个非常重要的环节，洗板的合格与否直接影响检测结果的准确性。因此，洗板时一定要先放好，洗涤开始时注意观察洗板机上的每个吸液针是否都一致地插入孔底，并且将孔内液体全部吸干，按说明书要求设置浸泡的时间以及洗涤的次数。洗涤结束后进行拍板，同时要用蒸馏水冲洗管道，避免由于洗液的结晶而造成管道堵塞。同时要注意各种ELISA试剂盒的洗涤液不可混用。

6 ELISA试剂盒显色与观察结果
按照说明书规定的时间、温度恒定、反应后终止，并在显色反应终止后立即用酶标仪进行比色。

7 小结
ELISA试剂盒在加液与混匀过程中不应产生气泡，否则会使测定的OD值偏高，易出现假阳性结果。
ELISA法是艾滋病初筛试验室检测HIV抗体普遍使用的方法，选择合格的试剂和仪器，操作中严格按照ELISA试剂盒说明书要求实验，这样就能保证检测结果的准确性。