1 ELISA试剂盒材料与方法
1.1 材料 梅毒抗体血清盘血清40份(购自卫生部临床检验中心,批号:200103,其中阳性22份,阴性18份),另外随机抽取西安市有代表性的无偿献血者梅毒抗体阴性血清100人份。梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒分别由美国诺泰公司(以下称ELISA2)提供。
1.2 方法
1.2.1 抽样方法
ELISA试剂盒将2003年1~5月西安市某血液中心无偿献血者梅毒抗体阴性血清标本按顺序、年龄、职业、文化程度分层,再按随机表中随机数字抽样,分层特征比例按该血液中心前3年无偿献血者以上分层特征构成比例进行,抽满100例为止。
1.2.2 盲法筛检
由评价监督者对考核血清盘重新编密码,由2名操作熟练的专业检验人员对编码血清盘用上述2种试剂盒进行盲法检测,操作严格按试剂盒说明书进行,筛检结果由全自动酶标仪自动打印OD值及阴、阳性结果。为考核试剂盒的可靠性,由2名以上专业检验人员在条件*相同的情况下,对考核血清盘40份血清进行第二次盲法筛检,第二次筛检前重新编密码,结果判读后再打开密码,核对结果。
1.2.3 金标准的确定
卫生部临床检验中心梅毒抗体血清盘已知阳性与阴性为金标准。
1.2.4 其实性评价
ELISA试剂盒将40份血清盘标本分为梅毒抗体阳性与阴性组,再将筛检试剂盒的筛检结果分为梅毒抗体阳性与阴性组,分组数据汇入筛检与诊断试验评价四格表,用分式 [3] 分别计算出真实性评价的8个指标,即灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性预告值、阴性预告值、准确度及约登指数。
1.2.5 可靠性评价
将40份血清盘样本*次与第二次筛检结果,分别汇入四格表,分别计算出各试剂盒重复试验的符合率与卡帕值,卡帕值的判定标准按Fleiss提出的3级划分标准评价,即0.75~1.00为符合很好,0.4~0.74为一般符合,0.01~0.39为缺乏符合 [3] 。
1.2.6 Cut-off值评价方法
为了评价两种试剂盒截断点或临界值的合理性,将考核血清盘中18份阴性血清及随机抽取的西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100人份测量出的OD值编制频数分布表,按筛检试验正常值范围确定方法 [4] ,分别用统计学界限的正态分布法及百分位数法计算出每种试剂盒的Cut-off值,并与按试剂盒说明书规定计算出的Cut-off值比较,结合阴性、阳性OD值频数分布特点,分析评价其合理性。
2 ELISA试剂盒结果
2.1 对考核血清筛检结果 在已知22份阳性中,ELISA1筛检出21份,ELISA2筛检出22份,在已知18份阴性标本中,ELISA1与ELISA2均检出17份。
2.2 真实性评价 利用两种试剂盒的筛检结果,计算出评价真实性的8个指标。
2.3 可靠性评价 ELISA1与ELISA2两次重复检出的阳性份数相同,重复试验的符合率均为*,卡帕值均为1.00。
2.4 Cut-off值的评价
ELISA试剂盒依据ELISA1与ELISA2试剂盒对考核血清盘18份阴性血清及100份西安市无偿献血者梅 毒抗体阴性血清测量的OD值,用统计学界限的正态分布法与百分位数法分别计算其Cut-off值,按两种ELISA试剂盒说明书规定方法分别计算出zui低Cut-off值,并将3种Cut-off值进行比较。结果发现,按规范的正态分布法与百分位数法计算出的Cut-off值均远低于试剂盒说明书规定的Cut-offzui小值,但结合140份无偿献血者阳性与阴性OD值实际频率分布特点分析,试剂盒规定的截断点是合理的,如果按统计界限计算的Cut-off值判读,并不能提高试剂盒的灵敏度,反而会使假阳性率升高。
ELISA1及ELISA2的灵敏度分别为95.5%,*,特异度分别为94.4%,94.4%,约登指数分别为0.90,0.94,两种试剂的重复符合率均为*,两种试剂的Cut-off值是合理的。
3 讨论
ELISA试剂盒评价某项筛检试验需要有一个*的客观性强的金标准,卫生部临床检验中心的梅毒抗体考核血清盘样本来自献血人群,阴、阳性界限清楚,含有梅毒抗体多种效价的血清,客观性强,是*的金标准。对于筛检试验的评价不仅要评价灵敏度、特异度,还需评价约登指数等多项综合性指标及可靠性指标,而且还需要对试剂盒阴性与阳性的截断点(Cut-off值)的合理性进行评价。