ELISA试剂盒操作步骤
①、配液:将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。
②、编号:将样品对应微孔按序编号,每板设阴性对照3孔、阳性对照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白对照1孔。人ELISA试剂盒
③、加样:分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl,用封板膜封板后置37℃温育30min。人ELISA试剂盒
④、洗涤:小心把封板膜揭去,用洗板机选择5次程序,洗板后拍干。
⑤、加酶:每孔加酶结合物100μl(空白对照孔除外),充分混匀,用封板膜封板后置37℃温育30min。
⑥、洗涤:小心把封板膜揭去,用洗板机选择5次程序,洗板后拍干。。
⑦、显色:每孔加入显色剂A液和B液各50μl,轻轻振荡混匀,封板后置37℃避光显色15min。
⑧、测定:每孔加终止液50μl,轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630 nm),空白调零,读取各孔OD值。
⑨、判断结果:计算临界值(cut-off)(CO)值。
临界值=阴性对照A均值+0.12
正常情况下,阴性对照孔的OD值≤0.10(若1孔阴性对照的OD值>0.1应舍弃,若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值>0.1,应重复实验。)。样品OD值<临界值者为HIV抗体阴性。
正常情况下,阳性对照孔的OD值≥0.80(若1孔阳性对照的OD值<0.8应舍弃,若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值<0.8,应重复实验。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。
注意:对于筛查阳性标本,应重新取样双孔复试,复试阳性者应按照《全国HIV检测管理规范》送HIV确证实验室进行确证试验。
质量控制:
每块板设阴阳性及空白对照,并于每次试验用自制质控血清作质控,将质控血清孔OD值采用“即刻法"计算或标在质控图上,如质控有效,表明试验可靠;如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。
干扰和交叉反应
生物参考区间
正常人阴性
患者检验结果的可报告区间
ELISA试剂盒阳性表示HIV病毒感染.
临床意义:
用于HIV感染的辅助诊断,抗HIV药物治疗的效果的监测。