脱氢酶(DHA)测试盒

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脱氢酶(DHA)测试盒测定意义

脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶，催化底物通过细胞色素系统被氧化，释放的能量供机体使用，是生物体取得能量的一种方式。

测定原理

在细胞呼吸过程中，氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF)，TF呈现红色，于485nm测定其吸光值，即得脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品

天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、酶标仪、96孔板、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递，请用户自备)。
试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃避光保存。临用前加入667μL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入9.333 mL蒸馏水混匀，避光保存。

试剂四：粉剂×1管，4℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水，充分溶解。

标准品：粉剂×1瓶，临用前加10 mL蒸馏水，充分溶解。1μmol/mL标准液，4℃避光保存。
商品属性：

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到570 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸馏水，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A空白管。显色后务必在30min内测完。

3. 标准管：取EP管，加入10μL标准品，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A标准管。显色后务必在30min内测完。

4. 测定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A测定管。显色后务必在30min内测完。

注意：空白管和标准管只需要测定一次。

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