简要描述:
α酮戊二酸脱氢酶(αKGDH)测试盒广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶。
更新时间:2024-09-02;厂商性质:经销商;览量:956
商品详情:
α酮戊二酸脱氢酶(αKGDH)测试盒测定意义
α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶。
货号 | 规格 | 检测方法 |
YSH3240 | 100管/96样 | 微量法 |
YSH3240-1 | 50管/48样 | 紫外分光光度法 |
测定原理
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶生成琥珀酰辅酶、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样品中AA提取:
1.按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行室温匀浆,然后转移到1.5 mL EP 管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自来水冷却后,8000g,,4℃离心10min,上清液置冰上待测。
2.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3.血清等液体:直接检测。
计算公式如下:
1、血清(浆)LAP活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=205.8×ΔA
2、组织、细菌或细胞中LAP活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总) ÷T=0.103×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细菌或细胞总数,2000万。
注意事项:
1. 试剂盒中试剂三、试剂四和标准品均需临用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天内使用完毕。
2. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于2.5),用蒸馏水稀释后再测定。
3. 与茚三酮反应在570nm处无吸收峰,因此,570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。
4.检出限为100μmol/L。
肌醇加氧酶ELISA试剂盒 MIOX免费代测试剂
肌醇单磷酶3ELISA试剂盒 IMPA3免费代测试剂
肌醇单磷酶2ELISA试剂盒 IMPA2免费代测试剂
肌醇单磷酶1ELISA试剂盒 IMPA1免费代测试剂
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柠檬合成酶(CS)测试盒/微板法50T
柠檬合酶(CS)测试盒/分光光度法25管/12样
柠檬合酶(CS)测试盒/分光光度法50管/24样
柠檬合酶(CS)测试盒/微量法100管/48样
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苹果合酶(MS)测试盒/微量法100管/96样