葡萄糖脱氢酶(GCDH)测试盒

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葡萄糖脱氢酶(GCDH)测试盒测定意义：

GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH，不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的是一种理

想的补钙制剂。因而，GCDH已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。

测定原理：

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下测定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃避光保存。临用前加入667μL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入9.333 mL蒸馏水混匀，避光保存。

试剂四：粉剂×1管，4℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水，充分溶解。

标准品：粉剂×1瓶，临用前加10 mL蒸馏水，充分溶解。1μmol/mL标准液，4℃避光保存。

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到570 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸馏水，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A空白管。显色后务必在30min内测完。

3. 标准管：取EP管，加入10μL标准品，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A标准管。显色后务必在30min内测完。

4. 测定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL试剂二，100μL试剂三和10μL试剂四，混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15 min，冷却后反复颠倒EP管数次，于570nm测定吸光值，记为A测定管。显色后务必在30min内测完。

注意：空白管和标准管只需要测定一次。

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