兔核因子κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒

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7.斑点ELISA（酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒）（Dot-ELISA（酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒）） 与常规的微量板ELISA（酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒）比较，Dot-ELISA（酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒）具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：（1） 载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜*干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。 　　（2） 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。 　　（3） 加被检血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。 　　（4） 加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。 　　（5） 显色 加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。 　　（6） 结果判定 以阳性、阴险血清作为对照，膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应，否则为阴性反应。 　

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